Question

【題目】（一）回答下列有關(guān)生物技術(shù)實踐的問題：

（1）某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10克、葡萄糖5克、蔗糖5克、KH2PO4 2克、顯色劑（伊紅美藍）0. 2g、瓊脂12克，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于_______培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細菌，需對培養(yǎng)基作出的兩項調(diào)整是___________、___________。

（2）對同一濃度的脲酶生產(chǎn)菌稀釋液，分別用血細胞計數(shù)板計數(shù)和稀釋涂布平板法計數(shù)，若不存在實驗誤操作，則前者的數(shù)量___________（填“多于”、“等于”或“小于”）后者，其原因是___________________。

（3）某科研工作者用特殊的化學物質(zhì)將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來的酶迅速發(fā)揮催化作用。請說明這是否運用了酶的固定化技術(shù)及其理由：_____________________________。

（二）下圖是治療性克隆時獲取病人胚胎干細胞的過程。

（1）圖示方法一和方法二都使用了去核卵母細胞，主要是因為___________。在培養(yǎng)過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養(yǎng)成分外，往往還添加動物血清，原因是__________________________。

（2）將分離出的胚胎干細胞放入有分化誘導因子的培養(yǎng)液中，誘導其分化成所需類型細胞或器官，完成該過程的實質(zhì)是____。在單克隆抗體制備過程中，誘導漿細胞與骨髓瘤細胞融合，此過程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標細胞分別為___；_______。

Answer 1

【答案】鑒別 將蛋白胨換為尿素， 瓊脂換成瓊脂糖 多于 前者產(chǎn)脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計數(shù)，后者存在多個產(chǎn)脲酶菌形成一個菌落的情況或只計數(shù)活菌。 未運用酶的固定化技術(shù)，因為酶未固定在不溶于水的載體上，也不能重復利用。 卵母細胞的細胞質(zhì)中有促進核基因表達的物質(zhì)； 動物血清營養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補人工培養(yǎng)基的不足。 基因的選擇性表達； 雜交瘤細胞； 能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。

【解析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅。

（一）

（1）分析培養(yǎng)基成分可知，培養(yǎng)基中加入顯色劑，因此根據(jù)用途可以判斷，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；培養(yǎng)基中的氮源為蛋白胨，若要分離能分解尿素的細菌需將培養(yǎng)基中蛋白胨換成尿素，將瓊脂換成瓊脂糖。

（2）對同一濃度的脲酶生產(chǎn)菌稀釋液，分別用血細胞計數(shù)板計數(shù)和稀釋涂布平板法計數(shù)，若不存在實驗誤操作，則前者的數(shù)多于后者，其原因是前者產(chǎn)脲酶菌絲分散的或活菌和死菌一起計數(shù)，后者存在多個產(chǎn)脲酶菌形成一個菌落的情況或只計數(shù)活菌。。

（3）某科研工作者用特殊的化學物質(zhì)將脲酶包裹，遇水后包裹層很快溶解，釋放出來的酶迅速發(fā)揮催化作用。此過程未運用酶的固定化技術(shù)，因為酶未固定在不溶于水的載體上，也不能重復利用。

（二）

（1）方法一和方法二都使用了去核卵母細胞，主要是因為卵母細胞的細胞質(zhì)可以給體細胞的細胞核提供表達全能性的環(huán)境。在培養(yǎng)過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養(yǎng)成分外，往往還添加動物血清，原因是動物血清營養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補人工培養(yǎng)基的不足。

（2）將分離出的胚胎干細胞放入有分化誘導因子的培養(yǎng)液中，誘導其分化成所需類型細胞或器官，完成該過程的實質(zhì)是基因的選擇性表達。在單克隆抗體制備過程中，誘導漿細胞與骨髓瘤細胞融合，此過程需要兩次篩選，這兩次篩選出的目標細胞分別為雜交瘤細胞和能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。