Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導(dǎo)入油菜葉片細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．
（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因，然后利用技術(shù)分別進行擴增．
（2）如圖1，選用圖中的限制酶處理兩個基因后再用酶處理，得到（填圖中字母）端相連的融合基因．
（3）將上述融合基因插入圖2所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（4）剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜．
（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術(shù)確定融合基因是否完成了（轉(zhuǎn)錄、翻譯）．

Answer 1

【答案】
（1）PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)/多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）
（2）ClaⅠ；DNA連接；AD
（3）基因表達載體；四環(huán)素
（4）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞
（5）轉(zhuǎn)錄
【解析】解：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因．（2）在上述引物設(shè)計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建表達載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入受體細(xì)胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞．該細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術(shù)確定融合基因是否完成了轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生了mRNA；用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

所以答案是：（1）PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)/多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）；（2）ClaⅠ；DNA連接；AD；（3）基因表達載體；四環(huán)素；（4）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；（5）轉(zhuǎn)錄。

【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．