Question

【題目】基因工程中最常用運(yùn)載體是質(zhì)粒，受體細(xì)胞是大腸桿菌。請(qǐng)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：

（1）基因的“剪刀”是指__________________，它切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有__________________和__________________。

（2）若要在體外短時(shí)間內(nèi)獲得大量目的基因，常采用__________________技術(shù)。

（3）基因工程中除質(zhì)粒外，__________________和__________________也可作為運(yùn)載體。

（4）基因工程中用原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是____________________________________。

（5）為保證目的基因在大腸桿菌中能夠表達(dá)，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒應(yīng)含有__________________。

Answer 1

【答案】限制酶??? 粘性末端??? 平末端??? PCR??? 噬菌體??? 動(dòng)植物病毒??? 繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對(duì)較少??? 啟動(dòng)子、終止子、目的基因???

【解析】

1.基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；

（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

（1）限制酶被稱為基因的“剪刀”，它能將雙鏈DNA分子進(jìn)行切割，不同的限制酶的識(shí)別位點(diǎn)不同，切割后產(chǎn)生末端也不同，一般有黏性末端（有堿基暴露）和平末端（無(wú)暴露堿基）兩種類型。

（2）若要在體外短時(shí)間內(nèi)獲得大量目的基因，常采用PCR技術(shù)，又叫多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

（3）基因工程的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒，其中質(zhì)粒最常用。

（4）由于原核細(xì)胞繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，因此，原核細(xì)胞經(jīng)常被作為基因工程的受體細(xì)胞。

（5）為保證目的基因在大腸桿菌中能夠表達(dá)，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒應(yīng)含有啟動(dòng)子、終止子、目的基因，除外還有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)。