Question

【題目】RT－PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增反應(yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過程如圖所示：

(1)過程Ⅰ需要加入緩沖液、原料、_____________、_______________和引物A等。

(2)過程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，其目的是__________________、_______________。

(3)過程Ⅱ擬對單鏈cDNA進行n次循環(huán)的擴增，理論上至少需要_________個引物B。

(4)利用RT－PCR技術(shù)獲取的目的基因_______________ (填“能”或“不能”)在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對某些微量RNA病毒的檢測，可提高檢測的靈敏度，原因是_______。

(5)RT－PCR過程中主要借助對__________的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進行。

Answer 1

【答案】RNA提取物 逆轉(zhuǎn)錄酶 讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活 使mRNA－cDNA雜合雙鏈解開 2n－1 能 增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度)，便于檢測 溫度

【解析】

對題圖進行分析可知，過程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄。過程Ⅰ的產(chǎn)物是cDNA，cDNA與mRNA形成雜合雙鏈。過程Ⅱ首先將mRNA－cDNA雜合雙鏈解開，再以單鏈cDNA為模板合成雙鏈DNA，最后利用PCR技術(shù)進行大量擴增。

(1)過程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄，需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶和引物A等。

(2)過程Ⅰ以mRNA為模板合成cDNA，形成cDNA-mRNA雜合雙鏈。因此，過程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95 ℃，使mRNA－cDNA雜合雙鏈解開，同時讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活。

(3)根據(jù)DNA分子半保留復(fù)制的特點，對單鏈cDNA進行n次循環(huán)的擴增，理論上至少需要2n-1個引物B。

(4)不同生物體內(nèi)DNA分子的基本結(jié)構(gòu)相同，且所有的生物共用一套密碼子，因此利用RT－PCR技術(shù)獲取的目的基因能在物種之間交流。利用該技術(shù)增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量(或濃度)，便于檢測。

(5)RT－PCR過程中主要借助對溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進行。