Question

【題目】埃博拉病毒（EBO）呈纖維狀，EBO衣殼外有包膜，包膜上有5種蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最為關(guān)鍵，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別。請(qǐng)回答下列問題：

（1）基因疫苗指的是DNA疫苗，要獲得編碼GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原體的RNA，并以RNA為模板通過___________法合成DNA。要大量獲得表達(dá)特異抗原的基因，可采用___________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。該技術(shù)必須需要脫氧核苷酸、ATP、____________、模板_________以及______________酶。

（2）以GP蛋白作為疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染力，但保留有__________的特性。為了從牛分泌的乳汁中生產(chǎn)GP蛋白，在基因?qū)�入牛�?/span>___________（受體細(xì)胞）前，基因的首端必須含有使其特異性表達(dá)的__________________，才能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程，這種通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物稱為_______________。轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功，可以通過_____________技術(shù)從分子水平進(jìn)行檢測。

（3）為了獲得純凈的針對(duì)EBO的單一抗體，科研人員利用經(jīng)EBO免疫后小鼠的_____________與鼠的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，需要通過兩次篩選后才能得到所需要的細(xì)胞，其中第一次篩選的目的是為了得到_____________細(xì)胞，第二次篩選的目的是為了得到能夠產(chǎn)生針對(duì)__________________的___________________細(xì)胞，通過這種方法獲得的抗體，其特點(diǎn)是___________________，可以用此抗體與藥物制成“生物導(dǎo)彈”，抗擊EBO。

Answer 1

【答案】反轉(zhuǎn)錄 PCR技術(shù) 引物 DNA Taq 抗原 受精卵 牛乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子 乳腺（房）生物反應(yīng)器 抗原—抗體雜交 B淋巴細(xì)胞 雜交瘤 EBO 雜交瘤 特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）以RNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉(zhuǎn)錄。PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因。PCR技術(shù)屬于體外DNA復(fù)制過程，該過程需要脫氧核苷酸、ATP、引物、模板DNA以及Taq酶。

（2）以GP蛋白作為疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身沒有感染力，但保留有抗原性，可引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫，但不會(huì)致病。培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，應(yīng)該以受精卵作為受體細(xì)胞；要使目的基因只在乳腺組織中表達(dá)，基因的首端必須含有使其特異性表達(dá)的乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子；這種通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物稱為乳腺（房）生物反應(yīng)器。轉(zhuǎn)基因牛是否培育成功，可以通過抗原—抗體雜交技術(shù)從分子水平進(jìn)行檢測。

（3）制備單克隆抗體時(shí)，應(yīng)該用經(jīng)EBO免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞與鼠的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合；融合后的細(xì)胞需要通過兩次篩選后才能得到所需要的細(xì)胞，其中第一次篩選的目的是為了得到雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選的目的是為了得到能夠產(chǎn)生針對(duì)EBO的雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。