Question

【題目】農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA插入到植物基因組中。圖示為利用農(nóng)桿菌培育轉(zhuǎn)基因植物的基本流程，請(qǐng)據(jù)圖作答：

（1）剪除Ti質(zhì)粒的某些片段、替換復(fù)制原點(diǎn)O與添加抗生素的抗性基因T的過(guò)程①中，需用___________________處理DNA以防止DNA片段的自身環(huán)化，需用___________________ “縫合”雙鏈DNA片段的平末端。

（2）目的基因是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因和一些____________________。由過(guò)程②形成的運(yùn)載體中，目的基因的首端具有___________________識(shí)別和結(jié)合的部位。

（3）過(guò)程③常用_______ 處理使農(nóng)桿菌成為感受態(tài)細(xì)胞。在過(guò)程⑤⑥前，常采用________________技術(shù)檢測(cè)農(nóng)桿菌和愈傷組織細(xì)胞中是否有目的基因及轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

（4）過(guò)程④需對(duì)植物細(xì)胞做沖洗和_______ 處理，然后用________________去除細(xì)胞壁。

Answer 1

【答案】（1）多種限制酶 T4DNA連接酶

（2）具調(diào)控作用的因子 RNA聚合酶

（3）Ca2+（CaCl2溶液） 核酸分子雜交（基因探針）

（4）消毒 纖維素酶（和果膠酶）

【解析】

試題分析：（1）防止DNA片段的自身環(huán)化，需用多種限制酶處理DNA，以形成不同的黏性末端；用T4DNA連接酶“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。

（2）目的基因是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因和一些具調(diào)控作用的因子。過(guò)程②為構(gòu)建基因表達(dá)載體，構(gòu)建的基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子位于目的基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。

（3）過(guò)程③是將表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，常用Ca2+（CaCl2溶液）處理使農(nóng)桿菌成為感受態(tài)細(xì)胞。檢測(cè)農(nóng)桿菌和愈傷組織細(xì)胞中是否有目的基因常采用DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)農(nóng)桿菌和愈傷組織細(xì)胞中是否有目的基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物常采用分子雜交技術(shù)。

（4）過(guò)程④表示從植物組織中獲取原生質(zhì)體，需對(duì)植物細(xì)胞做沖洗和消毒處理，以避免雜菌污染；然后用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。