Question

【題目】自然界中有很多種微生物，尚未能分離純化培養(yǎng)，科研人員開發(fā)了新的微生物分離技術以篩選微生物。

（1）配制培養(yǎng)基并分離微生物的步驟是：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板→_______→培養(yǎng)。篩選微生物的一般思路是，根據(jù)表型特征利用_______培養(yǎng)基進行篩選。

（2）若某種微生物沒有明顯表型特征時，就無法通過上述方法篩選，科研人員通過圖1所示的流程進行篩選。

①據(jù)圖分析，科研人員利用目標微生物的基因獲取大量膜蛋白，需要構建_______，并導入用________處理的大腸桿菌細胞中。

②利用兔子制備單克隆抗體時，第一次篩選獲得多種_______，第二次篩選利用_______原理篩選得到分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，進行克隆培養(yǎng)。 用目的微生物的膜蛋白而不是胞內(nèi)蛋白作為抗原的原因_______。

（3）將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，用流式細胞儀分離不同熒光強度的細胞，結(jié)果如圖2所示。對結(jié)果進行比較，應從區(qū)域_______（選填圖中數(shù)字）的細胞中篩選目標微生物。

Answer 1

【答案】接種 選擇 基因表達載體 Ca2+ 雜交瘤 抗原-抗體雜交 制備的單克隆抗體可以與微生物表面的膜蛋白結(jié)合，便于標記微生物 ②

【解析】

單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射到小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞。利用動物細胞融合技術將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合，并篩選雜交瘤細胞。單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），淘汰不需要的A、B、AA、BB型細胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。最終篩選獲得的雜交瘤細胞的特點是能無限增殖并能分泌特異性抗體，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體。

（1）制備固體平板培養(yǎng)基的主要操作步驟是：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板→接種→培養(yǎng)。選擇培養(yǎng)基可以抑制其它微生物生長，而有利于目的菌的生長，所以篩選微生物一般使用選擇培養(yǎng)基。

（2）①據(jù)圖分析，科研人員利用基因工程將目標微生物編碼膜蛋白的基因序列，構建基因表達載體，并導入用CaCl2處理的大腸桿菌細胞中，使目的基因增殖并表達可獲取大量膜蛋白。

②根據(jù)上述分析可知，制備單克隆抗體時，第一次篩選獲得多種雜交瘤，第二次篩選利用抗原-抗體雜交原理篩選得到分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細胞，進行克隆培養(yǎng)。用目的微生物的膜蛋白而不是胞內(nèi)蛋白作為抗原的原因是制備的單克隆抗體可以與微生物表面的膜蛋白結(jié)合，便于標記微生物。

（3）利用抗體和抗原特異性結(jié)合的特性，可將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是標記目標微生物。加入抗體后熒光性強的場所說明含有目標微生物多，所以據(jù)圖可知應從區(qū)域②的細胞中篩選目標微生物。