Question

【題目】據(jù)報道，科研人員已將POLLED基因的一個等位基因插入到奶牛胚胎成纖維細胞的基因組中。他們隨后進行體細胞核移植：將這種經(jīng)過基因改造的胚胎成纖維細胞移植到移除細胞核的奶牛卵母細胞中，使其重組并能發(fā)育為新的胚胎，并將形成的重組胚胎移植到代孕母奶牛子宮中，最終產(chǎn)下5只小牛，其中的兩只小牛Spotigy和Buri仍然是活的，如今有10個月大。更重要的是，他們沒有發(fā)現(xiàn)這些小牛存在角芽的證據(jù)。

（1）科研人員將POLLED基因的一個等位基因插入到奶牛胚胎成纖維細胞的基因組中的常用方法是___________________________。

（2）為了使POLLED基因的一個等位基因能夠表達和發(fā)揮作用，就要進行__________的構(gòu)建。在構(gòu)建過程中，要用到的兩種酶是_______________、__________________。

（3）從屠宰場收集奶牛卵巢，采集卵母細胞，在體外培養(yǎng)到___________________期。

（4）奶牛一般選取發(fā)育到______________階段的重組胚胎進行移植。移植的胚胎能在代孕奶牛子宮內(nèi)發(fā)育的免疫學基礎(chǔ)是___________________________________________。

（5）中國荷斯坦牛為我國奶牛的主要品種，它的育種原理是_________________。它與該轉(zhuǎn)基因奶牛的培育原理________（填“相同”或“不同”）。

Answer 1

【答案】顯微注射技術(shù) 基因表達載體 限制酶 DNA連接酶 減數(shù)第二次分裂中 桑椹胚或囊胚 受體子宮對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng) 基因重組 相同

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣.將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原——抗體雜交技術(shù).個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。。

2、動物胚胎發(fā)育的基本過程：（1）受精場所是母體的輸卵管。（2）卵裂期：細胞有絲分裂，細胞數(shù)量不斷增加，但胚胎的總體體積并不增加，或略有減小。（3）桑椹胚：胚胎細胞數(shù)目達到32個左右時，胚胎形成致密的細胞團，形似桑椹。是全能細胞。（4）囊胚：細胞開始出現(xiàn)分化（該時期細胞的全能性仍比較高）。聚集在胚胎一端個體較大的細胞稱為內(nèi)細胞團，將來發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱為囊胚腔。（5）原腸胚：有了三胚層的分化，具有囊胚腔和原腸腔。

（1）迄今為止，顯微注射技術(shù)是轉(zhuǎn)基因動物中采用最多，也是最為有效的一種將目的基因?qū)�入動物細胞的方法�?/span>

（2）基因表述載體的構(gòu)建是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。在構(gòu)建過程中，要用到的兩種酶是限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）與DNA連接酶。

（3）從屠宰場收集奶牛卵巢，采集卵母細胞，在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期。

（4）不同動物胚胎移植的時間不同，例如，牛、羊一般要培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段才進行移植。大量的研究已經(jīng)證明，受體子宮對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體子宮內(nèi)的存活提供了可能。

（5）我國奶牛的主要品種中國荷斯坦牛（原稱中國黑白花牛），是將國外的荷斯坦——弗里生牛引進后，在我國經(jīng)過長期馴化，與當?shù)攸S牛進行雜交和選育，逐漸形成的優(yōu)良品種。轉(zhuǎn)基因奶牛的培育原理也是基因重組。