Question

【題目】基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。圖中甲為限制酶EcoRⅠ的識(shí)別序列，圖乙表示目的基因及限制酶切點(diǎn)，圖丙表示目的基因上的DNA片段，圖丁表示質(zhì)粒。請(qǐng)回答下列問題：

（1）從供體真核生物的某組織中獲取mRNA，并以此為模板反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生多種片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，該受體菌群體叫____文庫，從該文庫中獲得的目的基因_________（填“含”或“不含”）啟動(dòng)子、終止子、內(nèi)含子。

（2）若用圖甲所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其專一性而言，切開的是G和A所在的兩個(gè)_________之間的_________鍵，即圖丙的②處。

（3）為了使目的基因和質(zhì)粒定向連接，并且有利于受體細(xì)胞的篩選，提高重組效率，應(yīng)該選擇的限制酶是PstⅠ和___________，如果大腸桿菌是受體細(xì)胞，則其體內(nèi)應(yīng)不含________基因，以利于篩選出含質(zhì)粒的受體菌。

（4）PCR技術(shù)擴(kuò)增圖乙中的目的基因時(shí)，需要提供模板、Taq酶、_______（原料）、引物C和引物_________等條件。

Answer 1

【答案】cDNA 不含 核苷酸（脫氧核苷酸） 磷酸二酯鍵 EcoRⅠ 抗四環(huán)素 dNTP B

【解析】

基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

（1））以mRNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄方法產(chǎn)生多種cDNA片段，與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，該受體菌群體叫做cDNA（部分DNA）文庫；從部分基因文庫中獲取的DNA沒有啟動(dòng)子、內(nèi)含子和終止子等。

（2）限制酶EcoRⅠ切開的是G和A所在的兩個(gè)核苷酸（脫氧核苷酸）之間的磷酸二酯鍵鍵，即圖丙的②處。

（3）為了使目的基因和質(zhì)粒定向連接并且有利于受體細(xì)胞的篩選，提高重組效率，又使四環(huán)素抗性基因不被破壞，應(yīng)該選擇的限制酶是PstⅠ、EcoRⅠ。如果大腸桿菌是受體細(xì)胞，則其體內(nèi)應(yīng)不含抗四環(huán)素基因，以利于篩選出含質(zhì)粒的受體菌。

（4）PCR技術(shù)擴(kuò)增圖乙中的目的基因時(shí)，需要提供模板、Taq酶、dNTP、引物C和引物B（由于DNA復(fù)制只能從5’到3’，所以應(yīng)選擇引物C和B）等條件。