Question

下面是一項“利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)人胰島素的方法”的專利摘要，請回答：
本發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)人胰島素。所用的人胰島素基因是依據(jù)植物“偏愛”的密碼子來設(shè)計所含的密碼子，通過人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰島素-COOH端加上KDEL內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解。將該基因置于CaMV35S啟動子和果實專一性啟動子2A12的驅(qū)動之下通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入番茄中，在番茄的果實中表達人胰島素。

（1）本專利是采用___________方法獲得目的基因的。獲得的人胰島素基因與人體細(xì)胞中胰島素基因的堿基序列不同，但兩者所編碼的蛋白質(zhì)中氨基酸序列相同，原因密碼子具有___________性，基因序列不同，蛋白質(zhì)可以相同。要想在體外獲得大量該目的基因的片段，可以采用____________技術(shù)。該技術(shù)中使用的關(guān)鍵酶是________________________；原料是____________________。

（2）根據(jù)上述摘要，轉(zhuǎn)基因操作時所用的載體是____________，載體上的____________可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。
構(gòu)建的基因表達載體中含有______________________________（從下列選項中選擇）。
①目的基因②CaMV35S啟動子③果實專一性啟動子2A12④引物
⑤標(biāo)記基因⑥內(nèi)含子滯留序列⑦終止密碼子⑧終止子

（3）如果要檢測在受體細(xì)胞中是否存在目的基因可采用____________技術(shù)。該技術(shù)中使用的基因探針也可以用來檢測___________________。還可以從________水平進行鑒定。

Answer 1

（1）人工合成   密碼子具有簡并性，基因序列不同，蛋白質(zhì)可以相同    PCR
熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（或Taq酶） 四種游離的脫氧核苷酸

（2）農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒  T–DNA    ①②③⑤⑧

（3）DNA分子雜交  目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA 個體生物學(xué)

（1）題中人胰島素基因采用人工合成方法獲得；由于密碼子具有簡并性，所以基因序列不同，蛋白質(zhì)相同。體外獲得大量目的基因片段的方法是PCR技術(shù)，該技術(shù)使用的酶是熱穩(wěn)定性DNA聚合酶，原料是四種游離的脫氧核苷酸。
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法使用的載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，載體上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上�；�因表達載體包括目的基因、啟動子、果實專一性啟動子2A12、終止子、標(biāo)記基因。
（3）檢測受體細(xì)胞中是否存在目的基因可采用DNA分子雜交技術(shù)，該技術(shù)中使用的基因探針也可檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。還可以從個體生物學(xué)水平進行鑒定。