Question

【題目】某植物蛋白酶抑制劑基因是重要的抗蟲基因，該基因轉錄的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。現(xiàn)利用PCR等技術擴增該基因，原理如下圖所示，其中①③表示有關過程，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示有關物質。請回答。

（1）過程①反應體系中，需要加入___________種引物，還需加入___________酶，生成雜交鍵物質Ⅰ。

（2）利用DNA末段轉移酶催化過程②，使cDNA單鏈左側末端増加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列[AAA(A) n]，其目的是便于后續(xù)引物設計，進而有利于過程③獲得目的基因序列，過程③反應體系需要添加的新引物序列是___________。

（3）與物質Ⅲ的化學組成相比，物質Ⅰ的不同之處在于Ⅰ中含有___________；與過程③相比，過程①中堿基配對方式的不同之處是___________。

（4）在物質Ⅲ的兩端通常還需增加___________識別序列，以便與相應的載體重組，再利用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為___________細胞，以利于將重組質粒導入細胞。

Answer 1

【答案】 一 反轉錄（或逆轉錄） TTT(T)n 核糖尿嘧啶 U—A 限制酶 感受態(tài)

【解析】

據圖分析，過程①表示逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；過程②表示利用DNA末段轉移酶使得cDNA單鏈左側末端増加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列（AAA(A) n）過程；過程③是cDNA單鏈獲得雙鏈DNA的過程。

（1）根據以上分析已知，過程①表示逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化，由于該過程是以單鏈的mRNA為模板的，因此該過程只需要一種引物。

（2）由于過程②在cDNA單鏈左側末端増加了十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列[AAA(A) n]，根據堿基互補配對原則，過程③反應體系需要添加的新引物序列是TTT(T)n。

（3）據圖分析可知，物質Ⅰ的兩條鏈分別是RNA鏈和DNA鏈，而物質Ⅲ的兩條鏈都是DNA鏈，因此物質Ⅰ特有的化學成分是核糖和尿嘧啶；過程①是逆轉錄，過程③是DNA復制，因此過程①中堿基配對方式的不同之處是U—A。

（4）物質Ⅲ兩端需要加上限制酶的識別序列，以便與相應的載體重組；利用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞，以利于將重組質粒導入細胞。