Question

【題目】纖維素的微生物分解對減輕廢棄物污染和作物秸稈再利用具有重要應用價值。某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣，加入選擇培養(yǎng)基中進行振蕩培養(yǎng)，待培養(yǎng)液混濁后接種于鑒別培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，篩選出能夠分解纖維素的微生物。請回答：

（1）上述選擇培養(yǎng)的目的是_________。培養(yǎng)過程中“振蕩”作用是_________。

（2）鑒別培養(yǎng)時，為了得到單菌落，常采用平板劃線法或_________進行接種，后一種方法測得的菌落數比活菌實際數目低的原因是_________。

（3）鑒別培養(yǎng)基中需加入_________才能對纖維素分解菌加以篩選。鑒別培養(yǎng)后，培養(yǎng)基中出現(xiàn)了幾個以菌落為中心的透明圈，根據_________（ 填 “菌落直徑”、“透明圈直徑”或“透明圈直徑/菌落直徑”）的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（4）從純化培養(yǎng)得到的纖維素分解菌中分離提取纖維素酶后怎樣確定該酶酶活性的高低？_________。

Answer 1

【答案】促進纖維分解菌生長，抑制其他微生物生長（或增加纖維分解菌的濃度） 促進微生物對營養(yǎng)物質和氧氣的充分接觸和利用 稀釋涂布平板法 兩個或多個細菌聚在一起只能形成一個菌落 剛果紅 透明圈直徑/菌落直徑 將分離提取的纖維素酶與纖維素混合，通過測定單位時間、單位體積中葡萄糖的生成量確定該酶酶活性的高低

【解析】

從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株；篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。

（1）選擇培養(yǎng)的目的是增加目的菌（纖維素分解菌）的濃度，同時也可抑制其他微生物的生長；為促進微生物對營養(yǎng)物質和氧氣的充分接觸和利用， 培養(yǎng)過程中需“振蕩”。

（2）常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法；其中稀釋涂布平板法的具體操作是先將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后取少量菌液涂布在培養(yǎng)基表面，合適的稀釋度下可以獲得單個菌體形成的菌落，但當兩個或多個細胞連在一起時，平板上只能形成一個菌落，故這種方法統(tǒng)計到的菌落數比活菌的實際數目要低。

（3）鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學藥品，通過微生物產生的某種代謝產物與其反應產生明顯的特征變化而加以篩選，對纖維素分解菌加以篩選時通常需要加入剛果紅；使用剛果紅染色法時，纖維素酶作用的透明圈的直徑與菌落直徑比越大，酶活性越強，故根據透明圈直徑/菌落直徑的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（4）纖維素酶活性的測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產生的葡萄糖進行定量測定，這種定量測定能對單位時間、單位體積重葡萄糖的增加量進行測定，從而反映出纖維素酶的活性。