Question

【題目】（四）回答基因工程的相關問題：

如表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖24、圖25中標注了相關限制酶的酶切位點，請回答下列問題：

【1】用圖24、25中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應選用BclI酶和_________酶切割，酶切后的質(zhì)粒和目的基因片段，通過______________ 酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

【2】若用上述限制酶獲得的目的基因長度為1.0 kb（1 kb = 1000對堿基），質(zhì)粒長度為3.2 kb，則獲得重組質(zhì)粒的長度為______。

A. < 4.2 kb B. > 4.2 kb C. = 4.2 kb

【3】重組質(zhì)粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，為了篩選出導入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在導入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是______，可能性最大的是______。

A. 在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長,在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長

B. 在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長,在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長

C. 在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都能正常生長

D. 在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長

【4】用Sau3A I限制酶______（填 能或不能）識別并切割BamHI酶的識別序列，若用Sau3A I限制酶完全切割圖24質(zhì)粒時，可獲得__________種大小不同的DNA片段。

【5】若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒導入至山羊的________________細胞中，那么上述過程屬于_______。

Answer 1

【答案】

【1】HindⅢDNA連接酶

【2】A

【3】AD

【4】能3

【5】受精卵B

【解析】分析圖24：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3AI的切割位點，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3kI識別。分析圖25：質(zhì)粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三種限制酶的識別序列和切割位點，其中BamHⅠ的切割位點位于兩種抗生素抗性基因上.選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但使用BamHⅠ可能破壞質(zhì)粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會破壞氨芐青霉素抗性基因，四環(huán)素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割。

【1】選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但使用BamHⅠ可能破壞質(zhì)粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會破壞氨芐青霉素抗性基因，四環(huán)素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

【2】質(zhì)粒被BclI和HindⅢ切割后，會丟失兩種酶切割位點之間的一段DNA，參與形成重組質(zhì)粒的質(zhì)粒長度<3.2kb，因此獲得重組質(zhì)粒的長度<1+3.2=4.2kb，故選A。

【3】在形成重組質(zhì)粒時，破壞了氨芐青霉素抗性基因，但四環(huán)素抗性基因完好。成功導入重組質(zhì)粒的理想大腸桿菌，應該具有四環(huán)素抗性特性，不具有抗氨芐青霉素特性，即在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長；但重組質(zhì)粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，因此可能出現(xiàn)含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌、不含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。因此將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長，因為含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌中氨芐青霉素抗性基因已被破壞了，但四環(huán)素抗性基因完好，因此肯定具有四環(huán)素抗性特性；不含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌都不具有抗性特性；又因為重組質(zhì)粒成功導入受體細胞的概率一般僅在10-7，成功概率較小，大多數(shù)大腸桿菌是不含有重組質(zhì)粒，因此可能性最大的在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長。

【4】根據(jù)表格中信息可知：BamHI酶識別和切割序列為，Sau3kI識別和切割的序列，可知BamHI酶的識別序列包含有Sau3kI識別的序列，因此用Sau3AI限制酶能識別并切割BamHI酶的識別序列。由此類推可知：限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3kI識別，因此用Sau3kI完全切割圖質(zhì)�？色@得3種大小不同的DNA片段。

【5】將目的基因?qū)�入動物細胞中，通常以受精卵作為受體細胞．該技術(shù)是動物基因工程的范疇。