Question

【題目】回答下列(一)、(二)小題：

(一)隨著社會的發(fā)展，石油產(chǎn)品的使用越來越多，石油烴污染也越來越嚴重。為了篩選出分解石油烴能力強的微生物，人們不斷地進行研究。下圖為獲取能分離出分解石油烴的微生物的土壤樣品后的研究過程，請回答有關(guān)問題：

(1)獲取土壤樣品的取樣地點最好選在____________________。為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①④所用的選擇培養(yǎng)基只能以石油烴作為唯一碳源，其原因是________________。

(2)根據(jù)⑤平板上生長的菌落，對④進行接種采用的方法是____________法，若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可以將圖中③取出的菌液________________。

(3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是__________。采用____________方法對其進行滅菌。劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤是______________________(寫出一點即可)。

(二)毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIFⅡ)基因與絨山羊的羊絨質(zhì)量密切相關(guān)。獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程如圖。

(1)獲取外源基因用到的工具酶是___________________。

(2)在過程②中，用____________酶處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之繁衍成一個新的細胞群體的技術(shù)，叫細胞克隆。未經(jīng)克隆化的細胞系具有________性。由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的______________，在培養(yǎng)過程中應(yīng)將培養(yǎng)瓶置于___________培養(yǎng)。

(3)若要獲得多只相同的轉(zhuǎn)基因山羊，可對圖中早期胚胎進行____________后進行胚胎移植。

(4)下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因山羊培育過程的敘述，錯誤的是________。

A．圖中重組細胞的細胞核來自導(dǎo)入目的基因的細胞

B．重組細胞最初分裂時開始進行DNA復(fù)制和基因的轉(zhuǎn)錄

C．將早期胚胎(如早期囊胚)植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位

D．如果KIFⅡ基因的序列是已知的，則可用化學方法合成或用聚合酶鏈反應(yīng)擴增該基因

Answer 1

【答案】 石油烴污染明顯處 只有能利用石油烴的微生物能正常生長繁殖 涂布分離 進行（梯度）稀釋 接種環(huán) 灼燒 接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 限制性核酸內(nèi)切酶 胰蛋白酶 異質(zhì) 動物血清 CO2培養(yǎng)箱 胚胎分割 B

【解析】試題分析：

(一）（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處。

（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。
培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法。
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體--菌落。

(二）分析題圖：圖示是獲得轉(zhuǎn)KIFⅡ基因的高絨質(zhì)絨山羊的簡單流程圖，其中①表示基因表達載體的構(gòu)建過程，該過程需要限制酶和DNA連接酶；②表示動物細胞培養(yǎng)過程；③表示從成年母絨山羊中獲取卵母細胞

解析：

一、（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處，為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養(yǎng)基，其成分的特點是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長。

（2）常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，若發(fā)現(xiàn)無法區(qū)分菌落，說明稀釋度不夠，可以將重新進行梯度稀釋。
（3）接種的工具為接種環(huán)；配置好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在無菌條件下進行。接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線 ，均會導(dǎo)致 造成劃線無菌落。

二、（1）①表示基因表達載體的構(gòu)建過程，該過程首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次還要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子。
（2）②表示動物細胞培養(yǎng)過程，該過程中要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理將皮膚組織塊，使之分散成單個成纖維細胞。未經(jīng)克隆化的細胞系具有異質(zhì)性。由于人們對動物細胞所需營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此在培養(yǎng)細胞時需在培養(yǎng)基中加入一定量的動物血清，在培養(yǎng)過程中應(yīng)將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)
（3）從重組細胞到早期胚胎需要采用（早期）胚胎培養(yǎng)技術(shù)．在胚胎移植前，通過胚胎分割技術(shù)可獲得較多胚胎

（4）A.圖中重組細胞的細胞核來自導(dǎo)入目的基因的細胞，A正確；

B.重組細胞最初分裂前就有基因的轉(zhuǎn)錄，B錯誤；

C.將早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的輸卵管或子宮角部位，便于早起胚胎的著床，C正確；

D.化學方法合成或用聚合酶鏈式反應(yīng)擴增可用于獲取已知序列的目的基因，D正確