Question

【題目】下圖是基因工程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）從基因文庫(kù)中提取的目的基因通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，需使用一種特殊的酶是__________________。

（2）進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用_____________酶切開(kāi)載體以插入目的基因．載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱(chēng)為______________。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使___________________________。

（4）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是_____________。

（5）在抗蟲(chóng)作物的培育過(guò)程中，將Bt毒蛋白基因?qū)�入作物受體細(xì)胞時(shí)，常用的方法是_____________。

（6）檢測(cè)細(xì)菌的目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，需要用______________做探針，再與相應(yīng)的物質(zhì)雜交。

Answer 1

【答案】熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（或Taq酶） 限制 啟動(dòng)子 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力弱 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 標(biāo)記的目的基因

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增目的基因時(shí)，需使用一種特殊的酶是熱穩(wěn)定的DNA聚合酶；

（2）進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用限制性?xún)?nèi)切酶切開(kāi)載體以插入目的基因，載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的啟動(dòng)子部位，以驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄；

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；

（4）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，由于未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒的能力弱，要用處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞；

（5）在抗蟲(chóng)作物的培育過(guò)程中，將Bt毒蛋白基因?qū)�入作物受體細(xì)胞時(shí)，常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；
（6）檢測(cè)細(xì)菌的目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，需要用標(biāo)記的目的基因做探針，再與相應(yīng)的物質(zhì)雜交。