Question

【題目】已知圖1，圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點，且限制酶的切點是唯一的，外源DNA插入會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活．請回答有關(guān)基因工程操作的問題：
（1）圖1表示的是一個經(jīng)過的作為載體的質(zhì)粒，其化學(xué)本質(zhì)是 ． 作為基因表達(dá)載體，除圖1所示結(jié)構(gòu)外，還需具有 ．
（2）根據(jù)圖中所給信息，構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)選用的限制酶是 ． 若將基因表達(dá)載體導(dǎo)人大腸桿菌，一般先用鈣離子處理，使其成為細(xì)胞，以利于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子；然后讓基因表達(dá)載體在中與該細(xì)胞混合，調(diào)控溫度完成轉(zhuǎn)化過程．
（3）為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加 ， 培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的菌落，用PCR技術(shù)鑒定時，所用的引物是圖2中 ．

Answer 1

【答案】
（1）人工改造；環(huán)狀DNA分子；目的基因和終止子
（2）BclI和HindⅢ；感受態(tài)；緩沖液
（3）四環(huán)素；引物甲和引物丙
【解析】解：（1）圖1表示的是一個經(jīng)過人工改造的作為載體的質(zhì)粒，質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)為小型環(huán)狀DNA；基因表達(dá)載體的組成包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因等．（2）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質(zhì)粒中的啟動子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法，即用Ca2+處理，使其處于感受態(tài)，以利于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子；然后讓基因表達(dá)載體在緩沖液中與該細(xì)胞混合，調(diào)控溫度完成轉(zhuǎn)化過程．（3）了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙． 所以答案是：（1）人工改造 環(huán)狀DNA分子 目的基因和終止子（2）BclI和HindⅢ 感受態(tài) 緩沖液（3）四環(huán)素 引物甲和引物丙
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．