Question

【題目】下圖表示我國首例綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的具體培育過程。請據(jù)圖回答下列問題：

（1）圖中A過程是采用從___________中獲取綠色熒光蛋白基因，該文庫中含有該生物部分基因序列。如果對已有的綠色熒光蛋白基因進(jìn)行大量擴(kuò)增，需要用_________方法，該方法的原理是DNA復(fù)制，這項(xiàng)技術(shù)需要用到Taq酶，該酶需從________的末端開始催化子鏈的延伸。

（2）將綠色熒光蛋白基因?qū)�入成纖維細(xì)胞，B過程首先要構(gòu)建_________，然后通過_______________________法導(dǎo)入成纖維細(xì)胞。

（3）從豬胚胎中獲取單個(gè)的成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，需用C______酶處理豬胚胎的部分組織。

（4）E過程得到卵母細(xì)胞后，要做去核處理，最常用方法是_________________________。

（5）G過程需要用___________（化學(xué)）方法激活重組細(xì)胞，使之完成分裂和發(fā)育進(jìn)程，并最終發(fā)育為早期胚胎。

（6）Ⅰ過程可以在分子水平上用___________________方法檢測綠色熒光蛋白基因是否成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】cDNA文庫 PCR技術(shù) 引物 基因表達(dá)載體 顯微注射 胰蛋白酶或者膠原蛋白酶 顯微操作去核法 乙醇、蛋白酶合成抑制劑或者鈣離子載體 抗原-抗體雜交

【解析】

分析圖解可以看出，該熒光克隆豬涉及了多項(xiàng)生物工程技術(shù)：首先導(dǎo)入目的基因的豬的成纖維細(xì)胞，要經(jīng)過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與成年母豬的卵細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆豬。該過程中利用了基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)。

（1）根據(jù)題意分析，A過程是從含有該生物部分基因序列的文庫中獲得目的基因的，因此該文庫為cDNA文庫；擴(kuò)增目的基因常用PCR技術(shù)，需要特殊的耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）的催化，該酶需從引物的末端開始催化子鏈的延伸。

（2）圖中B過程是將綠色熒光蛋白基因?qū)�入成纖維細(xì)胞的過程，該過程首先要構(gòu)建構(gòu)建基因表達(dá)載體，然后通過顯微注射技術(shù)將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入成纖維細(xì)胞（動(dòng)物細(xì)胞）。

（3）圖中豬胚胎的部分組織需要用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理，才能獲得單個(gè)的成纖維細(xì)胞。

（4）E過程得到卵母細(xì)胞常用顯微操作去核法去掉其細(xì)胞核，以作為核移植的受體細(xì)胞。

（5）G過程為重組細(xì)胞培養(yǎng)成早期胚胎的過程，該過程需要用乙醇、蛋白酶合成抑制劑或者鈣離子載體方法激活重組細(xì)胞，使之完成分裂和發(fā)育進(jìn)程，并最終發(fā)育為早期胚胎。

（6）Ⅰ過程綠色熒光蛋白基因表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白可以用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測。