Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）銹去津是一種含氮的有機(jī)化合物，它是廣泛使用的除草劑之一。銹去津在土壤中不易降解，為修復(fù)被其污染的土壤，按下面程序選育能降解銹去津的細(xì)菌（目的菌）。已知銹去津在水中溶解度低，含過量銹去津的固體培養(yǎng)基不透明。

回答下列問題：

（1）為選取能降解銹去津的細(xì)菌，應(yīng)選取____土壤樣品加____（A．蒸餾水 B．清水 C．生理鹽水 D．無菌水）制備成土壤浸出液。

（2）本實(shí)驗(yàn)中將細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基所用的接種方法為____，接種后的培養(yǎng)皿倒置后置于____中培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察菌落特征。

（3）測(cè)得A～C瓶中三類細(xì)菌的最大密度如下圖所示：

由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的目的是____并提高其密度；甲類細(xì)菌密度迅速降低的主要原因是____；

（4）圖中固體培養(yǎng)基上，____菌落即為目的菌落。

（二）綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個(gè)監(jiān)測(cè)完整細(xì)胞和組織內(nèi)基因表達(dá)及蛋白質(zhì)位置的理想標(biāo)記�；卮鹣铝袉栴}：

幾種限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)表

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—T TCGA，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—C TGCA，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用限制酶____，對(duì)____進(jìn)行切割。

（2）重組質(zhì)粒A常通過 ____法導(dǎo)入到豬胎兒成纖維細(xì)胞。

（3）檢測(cè)GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察的表達(dá)。圖中綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬中GFP既是____，也是____。

（4）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程中涉及到多項(xiàng)現(xiàn)代生物技術(shù)，圖中⑤⑥⑦過程屬于____技術(shù)，⑨過程通常選用____個(gè)細(xì)胞以上的早期胚胎進(jìn)行移植。

Answer 1

【答案】使用過銹去津 D 涂布接種法 恒溫培養(yǎng)箱 篩選或選擇目的菌 培養(yǎng)液中缺少甲類細(xì)菌可利用的氮源（或有氧條件抑制了甲類細(xì)菌的生長(zhǎng)） 有透明帶 HindⅢ和PstⅠ Ti質(zhì)粒和目的基因（或Ti質(zhì)粒） 顯微注射 目的基因 標(biāo)記基因 核移植 8

【解析】

（一）選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)。圖中從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的目的是擴(kuò)大培養(yǎng)，篩選目的菌。

（二）圖中①表示目的基因獲取，②表示用限制酶切割質(zhì)粒，③表示基因表達(dá)載體構(gòu)建，④表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細(xì)胞提取細(xì)胞核，⑥表示將豬卵母細(xì)胞去除細(xì)胞核，⑦表示核移植，⑧表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，⑨表示胚胎移植。

（一）

（1）為選取能降解銹去津的細(xì)菌，將銹去津作為唯一氮源，選取使用過銹去津土壤樣品加無菌水制備成土壤浸出液。

（2）本實(shí)驗(yàn)中使用的是涂布接種法，接種后的培養(yǎng)皿倒置后置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（3）由圖可知從A瓶到C瓶，甲類細(xì)菌變少，乙丙細(xì)菌增多，以此篩選目的菌并提高其密度；甲類細(xì)菌密度迅速降低的主要原因是培養(yǎng)液中缺少甲類細(xì)菌可利用的氮源。

（4）菌落有透明帶，說明銹去津被細(xì)菌分泌的酶降解，可篩選出目的菌。

（二）

（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點(diǎn)；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點(diǎn)；則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶把目的基因和運(yùn)載體相連。

（2）重組質(zhì)粒A常通過顯微注射法導(dǎo)入到豬胎兒成纖維細(xì)胞。

（3）據(jù)圖可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據(jù)此檢測(cè)GFP是否成功導(dǎo)入細(xì)胞，作為標(biāo)記基因。

（4）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過程屬于核移植技術(shù)，⑨過程通常選用8個(gè)細(xì)胞以上的早期胚胎進(jìn)行移植。