Question

【題目】下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程：

（1）若要體外獲得大量的VP40基因，可采用_______技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，若該目的基因循環(huán)擴(kuò)增3次，理論上需要消耗_______個引物。

（2）過程①中選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶切割的優(yōu)點(diǎn)是____________________，此外還要用到________酶。

（3）過程②中首先需要用Ca2＋處理大腸桿菌，使其處于________，VP40基因進(jìn)入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達(dá)的過程稱為____________。

（4）與植物原生質(zhì)體融合相比，過程④特有的誘導(dǎo)融合的方法是用____________處理。通常在選擇培養(yǎng)基中需加入__________，目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。選擇培養(yǎng)基上存活的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體________(填“是”或“不是”)單克隆抗體，對雜交瘤細(xì)胞還需要進(jìn)行_________培養(yǎng)和_______________，最終獲得單克隆抗體。

（5）上述克隆技術(shù)_________（填“能”或“不能”）體現(xiàn)動物細(xì)胞的全能性，_____________技術(shù)體現(xiàn)了動物細(xì)胞核的全能性。

Answer 1

【答案】PCR 14 防止自身環(huán)化 DNA連接 感受態(tài) 轉(zhuǎn)化 滅活的病毒 抗生素 不是 克隆化 抗體檢測（專一抗體陽性檢驗(yàn)） 不能 動物體細(xì)胞核移植

【解析】

上圖表示轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)埃博拉病毒蛋白疫苗以及用VP40蛋白作為抗原注射到小鼠體內(nèi)，引起小鼠的免疫反應(yīng)，然后提取相應(yīng)的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合制備單克隆抗體的過程。過程①為VP40基因表達(dá)載體的構(gòu)建，過程②是將該基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)，過程③是利用大腸桿菌生產(chǎn)VP40蛋白。過程④為漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合過程。

（1）采用PCR技術(shù)可擴(kuò)增大量的目的基因片段，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始復(fù)制，PCR技術(shù)運(yùn)用了DNA復(fù)制的原理，因此目的基因擴(kuò)增3代后產(chǎn)生子代DNA分子23，含16條鏈。又由于親代DNA分子的兩條鏈中不含引物，因此需要消耗23×2-2=14個引物。

（2）用限制酶EcoRⅠ和XhoⅠ切割產(chǎn)生不同末端，可防止目的基因和運(yùn)載體自身環(huán)化，保證了目的基因和質(zhì)粒的定向連接，另外還需要DNA連接酶構(gòu)建磷酸二酯鍵將黏性末端的接口進(jìn)行連接。

（3）用Ca2＋處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)，使基因表達(dá)載體更容易進(jìn)入大腸桿菌內(nèi)。VP40基因進(jìn)入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化。

（4）與植物原生質(zhì)體融合相比，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)融合的方法是用滅活的病毒處理。為防止培養(yǎng)過程中雜菌的污染，通常在選擇培養(yǎng)基中加入抗生素。從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞不止一種類型，故篩選得到的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體不是單克隆抗體，故還要經(jīng)篩選，得到的細(xì)胞還需轉(zhuǎn)移至多孔培養(yǎng)板中進(jìn)行再次篩選。即對雜交瘤細(xì)胞還需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，最終獲得單克隆抗體。

（5）上述克隆并沒有形成動物個體，故不能體現(xiàn)動物細(xì)胞的全能性，動物體細(xì)胞核移植技術(shù)體現(xiàn)了動物細(xì)胞核的全能性。