Question

【題目】回答與分離以尿素為氮源的微生物有關(guān)的問題：

（1）有些細(xì)菌含有_________，它們可以通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。請(qǐng)用化學(xué)反應(yīng)式表示這類細(xì)菌降解尿素的過程____________________。

（2）本實(shí)驗(yàn)需通過比較尿素固體培養(yǎng)基和 LB 固體培養(yǎng)基菌上的落數(shù)，了解土壤稀釋液中能以尿素為氮源的微生物的比例，因此要用____________（填方法）進(jìn)行接種。配置培養(yǎng)基時(shí)選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因是___________。尿素溶液的滅菌選擇的方法是______。

（3）已知氨與納氏試劑反應(yīng)生成淡紅色絡(luò)合物。為了定量測(cè)定所分離的微生物對(duì)尿素的降解能力，可選用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，并利用光電比色法測(cè)定培養(yǎng)液 NH3 的含量。步驟如下：第一步，預(yù)實(shí)驗(yàn)。將培養(yǎng)液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為 1cm 的比色杯在 570nm 處測(cè)定光密度值。若光密度值偏低，應(yīng)選擇____（ A．增大光程，光波長(zhǎng)不變B．增大光程，光波長(zhǎng)增加 C．減小光程，光波長(zhǎng)不變 D．減小光程，光波長(zhǎng)增加）處再次測(cè)定光密度值， 直到數(shù)據(jù)適宜為止。第二步，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。用蒸餾水配制______，與納氏試劑反應(yīng)后，用比色計(jì)測(cè)定，并制作____________的標(biāo)準(zhǔn)曲線。第三步，樣品處理。將培養(yǎng)液過濾后，進(jìn)行脫色處理，用納氏試劑顯色處理。

第四步，樣品測(cè)定與計(jì)算。

Answer 1

【答案】脲酶 涂布分離法 瓊脂糖中不含N元素 G6玻璃砂漏斗過濾 A 一系列濃度的氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 氨濃度與光密度值

【解析】

1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。
2、微生物常見的接種的方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）能夠降解尿素的細(xì)菌含有脲酶，其降解尿素的方程式為：。

（2）根據(jù)題意分析，本實(shí)驗(yàn)要觀察培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，因此應(yīng)該用涂布分離法進(jìn)行接種；配置培養(yǎng)基時(shí)選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因是瓊脂糖中不含N元素；尿素溶液的滅菌選擇的方法是G6玻璃砂漏斗過濾。

（3）根據(jù)題意分析，第一步預(yù)實(shí)驗(yàn)中，將培養(yǎng)液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為1cm的比色杯在570nm處測(cè)定光密度值。若光密度值偏低，應(yīng)選擇增大光程，光波長(zhǎng)不變，處再次測(cè)定光密度值，直到數(shù)據(jù)適宜為止。第二步，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作時(shí)，用蒸餾水配制一系列濃度的氨標(biāo)準(zhǔn)溶液，與納氏試劑反應(yīng)后，用比色計(jì)測(cè)定，并制作氨濃度與光密度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。