Question

【題目】某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌（目的菌）。實驗的主要步驟如下圖所示。請分析回答下列問題。

（1）培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是__________，這種培養(yǎng)基屬于_________培養(yǎng)基。

（2）目的菌生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的____________。實驗需要振蕩，培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是_______。

（3）對培養(yǎng)基進行滅菌的常用是_______方法。用稀釋涂布平板法測定密度時，實際活菌數(shù)要比測得的數(shù)目__________。

（4）某同學計劃統(tǒng)計污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用10-4、10-5、10-6稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養(yǎng)皿。從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是______________，此對照實驗的目的是____________________________。

（5）培養(yǎng)若干天后，應選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量_______的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使目的菌的數(shù)量_______（兩空選填增加或減少）

（6）實驗結束后，使用過的培養(yǎng)基應該進行_______處理才能倒掉，這樣做的目的是防止造成_______________。

（7）有同學將“目的菌”破碎并提取得到該菌蛋白質，利用凝膠過濾法分離蛋白質（如圖），他在操作中加樣的正確順序是______________。

Answer 1

【答案】篩選目的菌 選擇 化合物A 異養(yǎng)需氧型 高壓蒸汽滅菌法 高 不接種的空白培養(yǎng)基 證明培養(yǎng)基制備過程中是否被雜菌污染 減少 增加 滅菌 對環(huán)境的污染 4→1→2→3

【解析】

培養(yǎng)基的成分：水、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等。

培養(yǎng)基按功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

常用的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法和灼燒滅菌法。

凝膠色譜法：指根據相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。

（1）該實驗是為了篩選可以分解化合物的細菌，故培養(yǎng)基中加入化合物A是為了篩選目的菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）培養(yǎng)基中的化合物可以為目的菌提供生長所需的氮源和碳源。實驗需要振蕩，培養(yǎng)，由此推測“目的菌”需要氧氣，又因為它可以分解有機物A，故其代謝類型是異養(yǎng)需氧型。

（3）對培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌法處理。用稀釋涂布平板法測定密度時，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故實際活菌數(shù)要比測得的數(shù)目多。

（4）某同學計劃統(tǒng)計污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用10-4、10-5、10-6稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養(yǎng)皿。從設計實驗的角度看，還應設置的一組不接種的空白培養(yǎng)基作為對照實驗，通過觀察該培養(yǎng)基是否有菌落產生來判斷培養(yǎng)基制備過程中是否被雜菌污染。

（5）培養(yǎng)若干天后，應選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量減少的培養(yǎng)液（說明其中含有能分解化合物的微生物），接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，增加目的菌的數(shù)量。

（6）實驗結束后，為了避免污染環(huán)境，使用過的培養(yǎng)基應該進行滅菌處理才能倒掉。

（7）凝膠色譜中樣品的加入和洗脫：用吸管小心吸取1ml透析后的樣品，加到色譜柱的頂端，加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內，等樣品完全進入凝膠層后，關閉下端出口。加入磷酸緩沖液，連接緩沖液洗脫瓶打開下端出口進行洗脫。故對應的加樣順序是：4→1→2→3。