Question

【題目】嵌合抗原受體T細胞免疫技術(shù)（簡稱CAR－T技術(shù)）是目前較為有效的治療惡性腫痛的方式之一。該技術(shù)的原理是用基因工程技術(shù)，把從患者體內(nèi)獲取的T細胞加入一個能識別癌細胞同時激活T細胞的嵌合抗體（CAR），賦子T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力�；卮鹣铝袉栴}。

（1）正常細胞發(fā)生癌變主要與_________突變相關(guān)。

（2）體外培養(yǎng)從患者體內(nèi)獲取的T細胞必須保證無菌無毒的環(huán)境，具體措施_________（答出兩點即可）。

（3）該技術(shù)的關(guān)鍵是制備針對癌細胞的特異性抗體�？梢詫�癌細胞表面抗原注入小鼠體內(nèi)，從小鼠血液中分離特異性抗體。然后，分析該抗體的氨基酸序列，推導(dǎo)其應(yīng)有的_________序列，然后通過________（填儀器）合成相應(yīng)基因（CAR基因）。獲取的基因經(jīng)進一步修飾后可利用___________（填方法）導(dǎo)入T細胞。

（4）為檢測CAR基因在T細胞內(nèi)是否正常轉(zhuǎn)錄，需要提取T細胞的總mRNA與以___________為探針進行雜交，以篩選能夠正常轉(zhuǎn)錄的CAR－T細胞。

（5）篩選的CAR－T細胞在回輸病人體內(nèi)前，還需進行___________檢測和體外擴增，以確保其其有治療癌癥的效果。

Answer 1

【答案】原癌基因和抑癌基因 對培養(yǎng)液和所有用具進行無菌處理、在培養(yǎng)液中添加一定量抗生素、定期更換培養(yǎng)液防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞造成危害等 核苷酸（或脫氧核苷酸或基因） DNA合成儀 顯微注射法 放射性同位素標記的CAR基因 功能

【解析】

細胞癌變的內(nèi)因：原癌基因和抑癌基因發(fā)生基因突變，其中原癌基因負責(zé)調(diào)節(jié)細胞周期，控制細胞生長和分裂的過程，抑癌基因主要是阻止細胞不正常的增殖；蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白質(zhì)工程特有的途徑；以下按照基因工程的一般步驟進行。

（1）細胞發(fā)生癌變的原因是原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變。

（2）動物細胞培養(yǎng)時為營造無菌無毒的環(huán)境，可以通過以下措施實現(xiàn)：對培養(yǎng)液和所有用具進行無菌處理、在培養(yǎng)液中添加一定量抗生素、定期更換培養(yǎng)液防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞造成危害等；

（3）制備特異性抗體時可以將癌細胞表面抗原注入小鼠體內(nèi)，從小鼠血液中分離特異性抗體。然后，分析該抗體的氨基酸序列，推導(dǎo)其應(yīng)有的核苷酸序列，然后通過DNA合成儀合成相應(yīng)基因（CAR基因）；將目的導(dǎo)入動物細胞（T細胞）的方法為顯微注射技術(shù)。

（4）為檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，需要提取T細胞的總mRNA與以放射性同位素標記的目的基因（CAR基因）為探針進行雜交，若出現(xiàn)雜交帶，則證明轉(zhuǎn)錄成功。

（5）為確保CAR－T細胞有治療癌癥的效果，在回輸病人體內(nèi)前需進行功能檢測和體外擴增。